Tiasolüülsinine CAS 298-93-1

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. on Hiinas üks kogenumaid tiasolüülsinise cas 298-93-1 tootjaid ja tarnijaid. Tere tulemast hulgimüügi hulgi kvaliteetse tiasolüülsinise cas 298-93-1 müügiks siin meie tehasest. Saadaval on hea teenindus ja mõistlik hind.

Tiasolüülsinine, paremini tuntud kui MTT (3-(4,5-dimetüültiasool-2-üül)-2,5-difenüültetrasooliumbromiid), sisaldab põnevat duaalsust – see on nii oluline tööriist rakubioloogias kui ka kameeleoonne keemiline veidrus. See kollane kristalne pulber läbib elusrakkudes hämmastava metamorfoosi: mitokondri reduktaasid lõhustavad selle tetrasooliumitsüklit, muutes selle lahustumatuks lillaks formasaani sademeks – reaktsioon on visuaalselt nii silmatorkav, et sellest on saanud rakkude elujõulisuse mõõtmise kuldstandard. Kuid väljaspool laboripingi paljastab MTT rohkem esoteerilist käitumist; selle kristalne struktuur moodustab mikroskoobi all omapäraseid "heeringasabamustreid", samas kui selle redoksomadused võimaldavad tal osaleda eksootilistes fotokeemilistes reaktsioonides, kui see puutub kokku teatud lainepikkusega valgusega. Kummalisel kombel on ühendil haruldane nähtus, mida nimetatakse "metakroasiaks" - see on kontsentratsioonist ja molekulaarsest keskkonnast olenevalt erinevate värvide ilmnemine - omadus, mida tekstiilikeemikud kunagi "tarkade" värvainete loomiseks ära kasutasid. Hiljutised uuringud on avastanud selle ootamatu rolli teatud hingamisahela ensüümide nõrga inhibiitorina, mis viitab sellele, et see üldlevinud analüüsireagent võis peenelt mõjutada just neid metaboolseid protsesse, mida teadlased seda uurimiseks kasutavad. Orgaanilistes lahustites lahustatuna avaldavad MTT lahused ebatavalist fluorestsentsi summutavat toimet, mis on füüsikakeemikud hämmingus, mis viitab keerukatele molekulidevahelistele interaktsioonidele, mis ootavad endiselt täielikku selgitust.

Tiasolüülsinine,Keemiline nimetus on 3-(4,5-dimetüül-2-tiasool)-2,5-difenüültetrasooliumbromiid, lühendatult MTT, mis on oluline orgaaniline ühend. Alates sellest, kui Mosman teatas 1983. aastal esimest korda MTT värvimise kasutamisest rakkude kasvu ja ellujäämise määramiseks, on MTT-d laialdaselt kasutatud sellistes valdkondades nagu bioteadused, meditsiiniuuringud ja ravimiarendus. Allpool on selle eesmärgi üksikasjalik selgitus:

Rakendus rakubioloogia uuringutes

 

MTT on üks klassikalisi meetodeid rakkude proliferatsiooni määramiseks. Rakukultuuri ajal võivad dehüdrogenaasid, nagu suktsinaatdehüdrogenaas elusrakkude mitokondrites, redutseerida eksogeense MTT lahustumatuks sinilillaks kristalliliseks formazaniks, mis ladestub rakus. Surnud rakkudel puudub see redutseerimisvõime ja seetõttu ei tooda formasaani. Formasaani lahustamisel rakkudes ja selle valguse neeldumise väärtuse mõõtmisel kindlatel lainepikkustel (nt 490 nm või 562 nm), kasutades ELISA-lugejat, saab elusrakkude arvu kaudselt kajastada. Teatud rakkude arvu vahemikus on moodustunud MTT kristallide hulk võrdeline rakkude arvuga, seega saab rakkude proliferatsiooni määrata mõõdetud neeldumisväärtuse (OD väärtuse) põhjal.

Rakendus rakubioloogia uuringutes

 

MTT-d saab kasutada ka ravimite või muude ravimeetodite (nt kiirituskiirguse) toksilisuse määramiseks kultiveeritud rakkudele in vitro. Võrreldes ravirühma ja kontrollrühma OD väärtusi, saab hinnata ravimite või ravimeetodite mõju raku aktiivsusele. Mida suurem on OD väärtus, seda tugevam on raku aktiivsus; Vastupidi, see näitab, et mida nõrgem on raku aktiivsus või suurem on raku toksilisus. Sellel meetodil on laialdased rakendused ravimite sõeluuringus, toksikoloogiauuringutes ja muudes valdkondades. Kuigi MTT-d kasutatakse peamiselt rakkude proliferatsiooni ja tsütotoksilisuse mõõtmiseks, võib seda mõnel juhul kasutada ka raku apoptoosi uurimisel. Raku apoptoosi käigus muutub rakusisene ensüümi aktiivsus, mis võib mõjutada MTT redutseerimisvõimet. Võrreldes OD väärtuste erinevust apoptootiliste rakkude ja normaalsete rakkude vahel, saab eelnevalt kindlaks määrata raku apoptoosi esinemise. Siiski tuleb märkida, et MTT ei ole spetsiaalne meetod raku apoptoosi tuvastamiseks ja selle tulemusi tuleb põhjalikult analüüsida koos teiste apoptoosi tuvastamise meetoditega.

Rakendus ravimite väljatöötamisel

 

Ravimite väljatöötamise protsessis on MTT-test sageli kasutatav suure{0}}tootlikkusega ravimite sõelumismeetod. Inkubeerides uuritavat ravimit rakkudega ja kasutades raku aktiivsuse muutuste mõõtmiseks MTT testi, saab potentsiaalseid aktiivseid ravimimolekule kiiresti sõeluda. Selle meetodi eelisteks on lihtne töö, usaldusväärsed tulemused ja suur läbilaskevõime ning sellel on oluline rakendusväärtus ravimi väljatöötamise varases staadiumis. MTT analüüsi saab kasutada ka ravimite toimemehhanismi uurimiseks. Võrreldes rakkude aktiivsuse muutusi erinevates ravimravi tingimustes, saab eelnevalt kindlaks määrata ravimite mõju sellistele protsessidele nagu rakkude proliferatsioon ja apoptoos. Kombineerides muid molekulaarbioloogia meetodeid, nagu Western blot ja voolutsütomeetria, saab ravimite sihtmärke ja signaaliradu veelgi paljastada. Ravimiohutuse hindamisel saab MTT analüüsi kasutada ravimite toksilise toime hindamiseks rakkudele. Mõõtes rakkude OD väärtuse muutusi pärast ravimist, on võimalik kindlaks teha, kas ravimil on tsütotoksilisus ja toksilisuse tugevus. Sellel on suur tähtsus prekliiniliste uuringute ja ravimite kliinilise rakendamise suunamisel.

MTT rakendamine muudes valdkondades

 

Immunoloogilistes uuringutes saab MTT analüüsi kasutada lümfotsüütide proliferatsioonivõime määramiseks. Lümfotsüütide koosinkubeerimisel antigeenide või immunostimulaatoritega ja raku aktiivsuse muutuste mõõtmisega MTT testi abil saab hinnata lümfotsüütide immuunvastuse võimet. Seda meetodit kasutatakse laialdaselt vaktsiinide väljatöötamisel, immunoteraapias ja muudes valdkondades. Onkoloogiauuringutes saab MTT analüüsi kasutada kasvajarakkude proliferatsiooniaktiivsuse ja ravimitundlikkuse määramiseks. Võrreldes kasvajarakkude OD väärtuste muutusi erinevates ravimravi tingimustes, saab skriinida kasvajarakke inhibeeriva toimega ravimimolekule ja hinnata nende kasvajavastast toimet. See on kasvajate kliinilise ravi suunamisel väga oluline. Keskkonnatoksikoloogia uuringutes saab MTT analüüsi kasutada keskkonnasaasteainete toksiliste mõjude hindamiseks rakkudele. Inkubeerides rakke erineva kontsentratsiooniga saasteainetega ja mõõtes muutusi raku aktiivsuses MTT testi abil, saab määrata saasteainete toksilisust ja toimemehhanismi. Sellel on suur tähtsus keskkonnasaasteainete ökoloogiliste riskide hindamisel ja keskkonnakaitsepoliitika kujundamisel. 

Eksperimentaalsed sammudtiasolüülsininemeetod:

1: Trüpsiin seedib logaritmilise faasi rakke, tsentrifuugib ja kogub need pärast lõpetamist rakususpensiooni valmistamiseks ning reguleerib selle kontsentratsiooni 5-10 rakkude arvu × 104/ml järgi. Algajatele on vaja rakke saavutada 5-10 × 104/ml, sageli ei tea, kust alustada. Olen siin selleks, et pakkuda teile lihtsat meetodit lahtrite arvu esialgseks määramiseks.

Võtke näiteks 25 cm2, mida tavaliselt kasutatakse rakukultuuris:

1) Rakkude tihedus on umbes 80% ~ 90% (allpool olev joonis näitab rakkude ligikaudset olekut 80% ~ 90% tiheduse juures). Pärast seedimist ja tsentrifuugimist eemaldage supernatant ja lisage segamiseks 3 ml söödet.

2) Võtke uus 15 ml steriilne tsentrifuugitoru (96-süvendilise plaadi inokuleerimise järgmiseks etapiks) ja täitke see umbes 9 ml söötmega.

3) Võtke 1 ml esimeses etapis valmistatud 3 ml rakususpensioonist, lisage see ülemisse katsutisse ja loendage rakud pärast segamist. Sel ajal on see üldiselt 5–10 või vähem × 104/ml, mis võrdub 5–10 rakuga raku kohta rakkude loendusplaadi neljas lahtris (vt allolevat joonist); Kui kontsentratsioon ei ole piisav, lisatakse rakususpensioon vastavalt loendustulemusele ja iga tilk arvutatakse 50 ul.

4) Lahtrite arvu tuleks kohandada vastavalt katse erinevatele eesmärkidele. Näiteks võib üldises rakkude proliferatsioonikatses kasutada 2000 rakku süvendi kohta (vastab rakususpensiooni tihedusele 2 × 104/ml), 5000 kuni 10 000 rakku süvendi kohta (vastab rakususpensiooni tihedusele 5 × 104/ml). Lisaks tuleks rakkude arv määrata ka vastavalt nende omadustele, näiteks kasvukiirusele. Näiteks võib kiiremini kasvavate rakkude tihedus olla veidi väiksem.

2. Pärast rakususpensiooni valmistamist segage see õrnalt ja lisage igasse auku 100 ul, nii et testitavate rakkude tihedus oleks 5000-10 000 augu kohta (serva auk täidetakse steriilse PBS-ga).

L Märkus. Kuna rakud settivad ka pärast segamist, on vaja inokuleerimise ajal korduvalt segada, näiteks iga kuue augu järel, tagamaks, et inokulatsiooni rakkude tihedus on aukude vahel täpselt sama, mis on MTT tulemuste seisukohalt ülioluline.

3. Asetage inokuleeritud rakukultuuri plaat kultiveerimiseks inkubaatorisse, kuni raku monokiht on kaetud augu põhjaga (96-auguline lame plaat) ja lisage kontsentratsioonigradiendiga ravim. Põhimõtteliselt võib ravimit lisada pärast raku seinale kinnitamist või kaks tundi või pool päeva, kuid sageli lisame ravimit eelmise päeva pärastlõunal ja järgmisel hommikul. Üldiselt on seatud 5-7 gradienti, 100 ul augu kohta ja 3-5 mitu auku. Soovitav on seada 6, muidu on raske tegelikku olukorda kajastada. Järgmist joonist saab kasutada 96-augulise plaadi võrdlusetapina.

L Doseerimiseks lisavad mõned inimesed ravimeid otse 96 süvendiga plaatidele erinevas mahus, et moodustada kontsentratsioonigradient. Kuid ma arvan, et peaksime proovima EP katseklaasis segada erinevaid kontsentratsioone ravimeid, seejärel eemaldage 96-süvendilise plaadilt kultuuri supernatant (mida saab tühjenduspüstoliga ära imeda) ja lisage 100 ul erineva kontsentratsiooniga ravimeid sisaldavat söödet, mis tagab ravimi kontsentratsiooni täpsuse. Lisaks tuleb märkida, et kui seda meetodit kasutatakse, ärge imege enne ravimi lisamist kogu 96 süvendiga plaadikultuuri lahust. Proovid tuleks lisada kohe pärast osa imemist, et vältida rakusurma 96-augulise plaadi kuivamise tõttu.

Inkubeerige 4,5% CO2-ga 37 kraadi juures 16-48 tundi ja jälgige ravimi toimet pöördmikroskoobi all. Järgmisel joonisel on kujutatud tüüpiline ravimi tsütotoksilisuse gradient.

4. Lisage igasse süvendisse 10 ul MTT lahust (5 mg/ml, st . 0.5% MTT) ja jätkake kultiveerimist 4 tundi. Kui ravim võib reageeridatiasolüülsininekultuurilahuse võib pärast tsentrifuugimist ära visata ja MTT-d sisaldava kultuurilahuse võib lisada pärast 2-3 korda PBS-ga pesemist.

5. Peatage kultuur ja valmistage ette lahustumine ja kristallisatsioon.

Tiasolüülsinine, mille hiina nimi on Methyl Blue, on oluline orgaaniline ühend, mida kasutatakse laialdaselt meditsiinis, bioloogias ja keemias. meditsiinis kasutatakse seda sageli nitritimürgistuse, tsüaniidimürgistuse jne raviks ning seda kasutatakse ka mõne haiguse diagnoosimisel ja abistava ravi korral; Bioloogilistes uuringutes saab seda kasutada värvimisainena rakkude või kudede märgistamiseks. Kuid nagu paljudel ravimitel, võib ka metüleensinise kasutamisel olla mitmeid kõrvaltoimeid:

Seedesüsteemi kõrvaltoimed

Iiveldus ja oksendamine on metüleensinise üks levinumaid seedesüsteemi kõrvaltoimeid. Kui metüleensinine satub kehasse, võib see stimuleerida seedetrakti limaskesta, põhjustades rasketel juhtudel iiveldust ja isegi oksendamist. See sümptom on rohkem väljendunud, kui intravenoosse süstimise kiirus on liiga kiire või annus on liiga suur. Näiteks mõnel kliinilisel juhul võivad patsiendid vahetult pärast metüleensinise kiiret intravenoosset süstimist kogeda märkimisväärset iiveldust ja oksendamist, mis mõjutab nende mugavust ja ravikogemust. Mõnel patsiendil võib pärast metüleensinise kasutamist tekkida kõhuvalu ja valu aste võib varieeruda sõltuvalt individuaalsetest erinevustest, ulatudes kergest ebamugavustundest kuni tugevama valuni.

Samal ajal võib sellega kaasneda ka kõhulahtisus, mis võib olla tingitud metüleensinise häiretest soolestiku peristaltikale ja seedefunktsioonile, mis põhjustab soolestiku ebanormaalset liikumist ja muutusi seedevedeliku sekretsioonis. Pikaajaline või sagedane kõhuvalu ja kõhulahtisus ei mõjuta mitte ainult patsiendi kehalist tervist, vaid ka teisi toitainete imendumist, imendumist.

Kuseteede süsteemi kõrvaltoimed

Pärast metüleensinise kasutamist muutub uriini värvus siniseks, mis on tingitud metüleensinise ja selle metaboliitide eritumisest neerude kaudu uriini. Üldiselt on see uriini värvuse muutus ajutine ega avalda tõsist mõju füüsilisele tervisele. Kuid teatud erijuhtudel, näiteks kuseteede haigustega patsientidel, võivad uriini värvuse muutused häirida haiguse diagnoosimist ja arstid peavad läbi viima tervikliku analüüsi, mis põhineb muudel uuringunäitajatel. Urineerimise ajal võivad mõned patsiendid tunda kipitust ureetra avauses.

 

Selle põhjuseks võib olla metüleensinise ergutav toime kusiti limaskestale, eriti kui uriini kontsentratsioon on kõrge või kusiti limaskesta hõõrutakse urineerimise ajal, on kipitustunne tugevam. See sümptom võib põhjustada patsientidele teatud ebamugavust ja mõjutada nende igapäevast elu.

Neuroloogilised kõrvaltoimed

Pearinglus ja peavalu on metüleensinise tavalised neuroloogilised kõrvalnähud. Pärast metüleensinise kasutamist võivad patsiendid tunda peas peapööritust ja desorientatsiooni või ebamugavustunnet, nagu turse ja valu peas. See sümptom võib mõjutada patsiendi tähelepanu ja mõtlemisvõimet ning vähendada töö ja elu tõhusust. Pearingluse ja peavalu tekkimine võib olla seotud metüleensinise mõjuga ajuveresoontele ja närvidele ning konkreetne mehhanism vajab veel täiendavat uurimist. Harvadel juhtudel võib metüleensinine põhjustada teadvushäireid, nagu unisus, kooma jne.

See on tavaliselt tingitud metüleensinise liigsest kasutamisest või patsientide liigsest tundlikkusest ravimi suhtes, mis põhjustab kesknärvisüsteemi tõsist pärssimist. Teadvusehäired on tõsine kõrvalnäht, mis võib ohustada patsiendi eluohutust ja nõuda viivitamatut päästeabi.

1.Mis on tiasolüülsinise tetrasooliumbromiidi kasutamine?

Tiasolüülsinist tetrasoolsinist (MTT) võib kasutada rakkude proliferatsiooni mõõtmiseks. MTT toodab kollakat lahust, mis muudetakse elusrakkude mitokondriaalsete dehüdrogenaaside toimel tumesiniseks, vees lahustumatuks -MTT formatsaaniks.

2. Kas tiasolüülsinist on ohutu säilitada?

Temperatuuritingimused: sulgege pulber ja hoidke seda külmkapis -20 kraadi juures külmutamiseks, mis võib tõhusalt pikendada säilivusaega (tavaliselt 1–2 aastat); lühiajaliseks säilitamiseks (1 kuu jooksul) võib ajutiselt hoida 4 kraadises külmkapis.

Valgus-- ja niiskuskindel-Nõuded: MTT pulber on valgus-tundlik ja seda tuleb hoida pruunides reaktiivipudelites või tinafooliumiga mähitud läbipaistvates pudelites. Vahepeal tuleks lisada kuivatusaineid (nt silikageeli), et vältida pulbri niiskuse imamist ja paakumist.

3.Kas tiasolüülsinise värvus muutub?

Kui lahuses on sinililla sade või see muutub tumedamaks, näitab see, et lahus on oksüdeerunud ja seda ei saa jätkata.
Vältige lahuse asetamist toatemperatuurile või heledasse keskkonda, kuna see võib kiiresti ebaõnnestuda.

Kuum tags: tiasolüülsinine cas 298-93-1, tarnijad, tootjad, tehas, hulgimüük, ost, hind, hulgi, müük