Retatrutiid(link:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) on keemiliselt sünteesitud pikatoimeline GLP-1R/GIPR/GCGR polüpeptiidagonist, mis on mõeldud täiskasvanute 2. tüüpi diabeedi raviks, kehakaalu reguleerimiseks ja mittealkohoolse rasvmaksa/mittealkohoolse steatohepatiidi raviks. Selle toote täiskasvanute II tüüpi diabeedi näidustus on kliiniliseks kasutamiseks heaks kiidetud 29. augustil 2023. Lisaks on viimases läbivaatamise etapis mittealkohoolse rasvmaksa/mittealkohoolse steatohepatiidi näidustuste kliinilise registreerimise taotlus. Maailmas on väljatöötamisel kaheksa GLP-1R/GIPR/GCGR agonisti, millest Rita's Retatrutide on teinud kõige kiiremini edasi ja käivitas selle aasta juunis kolmanda faasi kliinilise uuringu. Samal kuul teatas Rita, et ADA aastakoosolekul avaldati retatrutiidi teise faasi uuringuandmed, mis näitasid, et 24. nädalal saavutas retatrutiid (1 mg, 4 mg, 8 mg või 12 mg) efektiivsuse peamise lõpp-punkti. hindamine rasvunud või ülekaaluliste diabeedita osalejate jaoks, kelle keskmine kaalulangus oli 17,5%. Sekundaarsete tulemusnäitajate hulgas saavutati 48-nädalase ravi lõpus keskmine kaalulangus 24,2%. Oleme avaldatud meetodi alusel peptiidi ka laboris sünteesinud. Konkreetset sünteesimeetodit kirjeldatakse lühidalt ja konkreetsed sammud saab meile saata e-posti teel.
1. meetod:
Üksikasjalikud sammud Retarutiidi sünteesimiseks laboris tahkisünteesi abil on järgmised:
Valmistage ette vajalikud reaktiivid ja instrumendid: sealhulgas aminohapped, diklorometaan, kaaliumkarbonaat, etoksüülitud silikageel, atsetonitriil, püridiin, N-metüülmorfoliin, diisopropüületüülkloriidi allikas, trifluoroäädikhape, DIPEA, Boc-kaitsega aminohapped ja muud magnetreaktiivid ja muud segajad , rootoraurustid ja muud instrumendid.
(1) Boc-kaitstud aminohapete süntees: Lahustage vajalikud aminohapped diklorometaanis, lisage kaaliumkarbonaadi pulber, segage ühtlaselt, lisage etoksüülitud silikageel, jätkake segamist ning seejärel lisage Boc-kaitstud aminohapete saamiseks püridiin ja N-metüülmorfoliin.
(2) Tahkefaasi süntees: segage atsetonitriil, diisopropüületüülkloriidi allikas ja trifluoroäädikhape kokku, segage ühtlaselt, lisage valmistatud Boc-kaitstud aminohapped ja jätkake segamist, et saada tahke faasi sünteesiprodukt.
(3) Kaitse eemaldamise rühm: lahustage tahke faasi süntees diklorometaanis, lisage trifluoroäädikhape, segage ühtlaselt ja lisage seejärel DIPEA. Jätkake segamist, et saada kaitsmata tahke faasi süntees.
(4) Puhastamine: lahustage kaitsmata tahke faasi süntees vees, reguleerige pH umbes 9-ni.0 naatriumhüdroksiidi lahusega, seejärel reguleerige pH väärtuseni umbes 5.0 äädikhappega ja lõpuks. sadestage puhas produkt eetriga.
2. meetod:
Üksikasjalikud sammud Retarutiidi sünteesimiseks laboris vedelfaasilise sünteesi abil on järgmised:
Valmistage ette vajalikud reaktiivid ja instrumendid: sealhulgas arginiin, glütsiin, atseetanhüdriid, trietüülamiin, kaaliumkarbonaat, diklorometaan, metanool, püridiin, N-metüülmorfoliin, äädikhappe anhüdriid, naatriumatsetaat ja muud reaktiivid, samuti instrumendid, nagu segajad, eralduslehtrid, vaakumpumbad, ahjud ja kromatograafilised kolonnid.
(1) Lahustage arginiin ja glütsiin sobivas koguses diklorometaanis, lisage sobiv kogus atseetanhüdriidi ja trietüülamiini ning segage segaja all ühtlaselt.
(2) Viige lahustunud segu ahju ja kuumutage seda 80 °C juures 1 tund, et aminohappejäägid atsetüülida.
(3) Neutraliseerige reageerinud lahus kaaliumkarbonaadi pulbriga, et neutraliseerida lahuses olev äädikhape, et tekitada naatriumatsetaat, ja seejärel ekstraheerida tekkinud peptiid diklorometaaniga.
(4) Peske ekstraheeritud peptiidi lahus metanooliga ja filtreerige toorpeptiidi saamiseks vaakumpumbaga.
(5) Lahustage toorpeptiid sobivas koguses püridiinis ja N-metüülmorfoliinis, lisage sobiv kogus atseetanhüdriidi ja naatriumatsetaati ning segage segaja all ühtlaselt.
(5) Filtreerige reageerinud lahus vaakumpumbaga, peske filtrikook metanooliga ja filtreerige seejärel vaakumpumbaga, et saada lõplik Restarutide.
3. meetod:
Üksikasjalikud sammud Retarutiidi sünteesimiseks laboris keemiliste meetoditega on järgmised:
Valmistage ette vajalikud reaktiivid ja instrumendid: sealhulgas arginiin, glütsiin, atseetanhüdriid, trietüülamiin, kaaliumkarbonaat, diklorometaan, metanool, püridiin, N-metüülmorfoliin, äädikhappe anhüdriid, naatriumatsetaat ja muud reaktiivid, samuti instrumendid, nagu segajad, eralduslehtrid, vaakumpumbad, ahjud ja kromatograafilised kolonnid.
(1) Lahustage arginiin ja glütsiin sobivas koguses diklorometaanis, lisage sobiv kogus atseetanhüdriidi ja trietüülamiini ning segage segaja all ühtlaselt.
(2) Viige lahustunud segu ahju ja kuumutage seda 80 °C juures 1 tund, et aminohappejäägid atsetüülida.
(3) Neutraliseerige reageerinud lahus kaaliumkarbonaadi pulbriga, et neutraliseerida lahuses olev äädikhape, et tekitada naatriumatsetaat, ja seejärel ekstraheerida tekkinud peptiid diklorometaaniga.
(4) Peske ekstraheeritud peptiidi lahus metanooliga ja filtreerige toorpeptiidi saamiseks vaakumpumbaga.
(5) Lahustage toorpeptiid sobivas koguses püridiinis ja N-metüülmorfoliinis, lisage sobiv kogus atseetanhüdriidi ja naatriumatsetaati ning segage segaja all ühtlaselt.
(6) Filtreerige reageerinud lahus vaakumpumbaga, peske filtrikook metanooliga ja filtreerige seejärel vaakumpumbaga, et saada lõplik Restarutide.
Sihtmolekuli saamiseks on vaja mitut orgaanilise sünteesi reaktsiooni. Lisaks sellele kasutab see meetod mitut orgaanilist reaktiivi ja keerulisi töötingimusi, mistõttu Rotarutide keemiline süntees laboris ei sobi tavaliselt suuremahuliseks tootmiseks ega tööstuslikeks rakendusteks. Suuremahulise tootmise või tööstuslike rakenduste jaoks on sagedamini kasutatav meetod Rotarutiidi valmistamine sünteesimeetodite abil, nagu biosüntees või vedelfaasiline süntees, mis on laboratoorselt suhteliselt väikesed, suhteliselt lihtsad ja sobivad väikeste tootekoguste valmistamiseks. . Nende meetoditega saadud Retarutiid on struktuurilt ja bioloogiliselt aktiivsuselt sarnane või sarnane keemiliste meetoditega sünteesitud Retarutiidiga, kuid selle eeliseks on suurem saagis ja lihtsam valmistamine. Samal ajal on neil ka parem industrialiseerimispotentsiaal ja laiemad rakendusväljavaated.
4. meetod:
Üksikasjalikud sammud Retarutiidi sünteesimiseks laboris bioloogiliste meetoditega on järgmised:
Vajalike geenide ja reaktiivide ettevalmistamine: hankige geeniraamatukogust Retatrutide geeni sisaldavad plasmiidid, transformeerige plasmiidid retsipientrakkudega (nt Escherichia coli) ja hankige Retatrutide geeni sisaldavad insenerbakterid.
(1) Tehniliste bakterite kultiveerimine: sobivate temperatuuri, pH ja ioonide kontsentratsiooni tingimustes kasutage tehniliste bakterite kultiveerimiseks söödet, mis võimaldab neil paljuneda suurtes kogustes.
(2) Retarutiidi ekstraheerimine: kultiveeritud inseneribakterid purustatakse purustajaga ja rakufragmendid eraldatakse Retarutiidist, kasutades selliseid meetodeid nagu ultrafiltreerimine ja sedimentatsioon, et saada toorprodukt.
(3) Retarutiidi puhastamine: toorretarutiidi puhastamisel kasutatakse kõrge puhtusastmega Retarutiidi saamiseks kromatograafiatehnoloogiat.
Rotarutiidi tuvastamine ja tuvastamine: puhastatud Rotarutiidi struktuuri tuvastamiseks ja tuvastamiseks kasutage kõrgjõudlusega vedelikkromatograafiat, massispektromeetriat, tuumamagnetresonantsi ja muid tehnikaid.
Retarutiidi bioloogilise sünteesi keemilise reaktsiooni võrrand laboris hõlmab peamiselt keemilisi reaktsioone geeniekspressiooniprotsessi ajal, sealhulgas kahte etappi: transkriptsioon ja translatsioon.
Transkriptsioon: DNA kaheahelaline avaneb, kasutades ühte ahelat mallina RNA ahelate sünteesimiseks, mis nõuab RNA polümeraasi kaasamist. Reaktsioonivõrrand on järgmine:
DNA kaheahelaline: DNApol → mRNA+DNApol
Tõlge: Ribosoomid seonduvad mRNA-ga, et sünteesida peptiidahelaid – protsess, mis nõuab aminohapete ja energia osalemist. Reaktsioonivõrrand on järgmine:
Ribosoom+mRNA → Peptiidiahel+GDP+Pi+H2O
Peptiidiahel+ATP → Peptiidiahel+AMP+PPi
Nende hulgas on DNApol DNA polümeraas; MRNA tähistab messenger RNA-d; Ribosoomid esindavad ribosoome; Peptiidahelad esindavad polüpeptiidahelaid; SKT esindab guanosiindifosfaati; Pi on anorgaaniline fosforhape; H2O on vesi; ATP on adenosiintrifosfaat; AMP on adenosiinmonofosfaat; PPi tähistab anorgaanilist pürofosfaati. Need reaktsioonid tekitavad Retarutiidi sünteesiks vajalikud peptiidahelad, mida seejärel töödeldakse ja muudetakse hilisemates etappides Retarutiidi saamiseks.
Ülaltoodud on levinud meetodid Rotarutide sünteesiks laboris, millest igaühel on erinevad eelised, puudused ja kasutusala. Laboris kasutatakse tavaliselt vedelfaasi sünteesi ja tahke faasi sünteesi meetodeid väiketootmiseks teadus- ja eksperimentaalseks kasutamiseks; Seevastu tööstuslik tootmine kasutab turunõudluse rahuldamiseks suuremahuliseks tootmiseks biosünteesi ja vedela/tahke faasi tootmist. Tuleb märkida, et need meetodid nõuavad ranget tingimuste optimeerimist ja protsessi kontrolli, et tagada lõpptoote kvaliteet ja puhtus.