Sephadex G75on omamoodi hea jõudlusega geelifiltri täiteaine. See valmistatakse dekstraani ja epiklorohüdriini ristamisel. See on helmekujuline geel, millel on suur hulk hüdroksüülrühmi, mida on lihtne vees ja elektrolüütide lahustes paisuda. Selle ühendi maksimaalne välistamispiirang on 80000 ja konkreetne turse kraad sõltub kuiva vaigu ja töötingimuste hulgast. Näiteks võib teatud tingimustes kuiva vaiku turse aste olla 519ml/g. Kui töö pH vahemik on 6,210 (mõne toote puhul 5,210), võib ühend püsida stabiilsena. Selle jõudluse ja stabiilsuse säilitamiseks on soovitatav hoida seda toatemperatuuril, jahedal ja valguse vahemikus 430 kraadi (või 425 kraadi). See aine sobib eriti suurte biomolekulide jaoks, mille molekulmass on suurem kui 80000. Kasutatakse peamiselt selliste suurte biomolekulide magestamiseks ja puhverdamiseks. Ühe - -toimingu kaudu on võimalik saasteaineid kiiresti magestada, eemaldada ja molekule uude puhverlahusesse üle kanda. Lisaks magestamisele ja puhvri asendamisele sobib Sephadex G-75 ka suurte biomolekulide puhastusprotsessi jaoks.
 |
 |
Sephadex G75on dekstraanigeel, mida kasutatakse peamiselt biokeemia ja molekulaarbioloogia eraldamise ja puhastamise tehnoloogia jaoks. Selle aine peamised kasutusalad on järgmised:
Magestamisprotsessis võib see tõhusalt eemaldada soolad (tavaliselt väikesed molekulid anorgaanilised soolad) bioloogilistest molekulaarlahendustest. Selle aine eeliseks on see, et seda on lihtne töötada, kiire ja see võib saavutada tõhusa magestamise, muutmata biomolekulide aktiivsust. Lisaks sobib see suurepärase keemilise stabiilsuse ja biosobivuse tõttu mitmesuguste biomolekulide, sealhulgas valkude, peptiidide, nukleiinhapete jms magestamiseks, praktilistes rakendustes kombineeritakse geeli magestamine tavaliselt muude puhastustehnoloogiatega, näiteks ioonvahetus, afiinsuse kromatograafia jne, et saada põhjalikke puhastamist ja eraldamist.
Sellel ainel on lai valik puhvri asendamisel, eriti biokeemia ja molekulaarbioloogia valdkondades. Näiteks valkude puhastamise protsessis on mõnikord vaja valkude üle viia ühest puhversüsteemist teise puhversüsteemi, mis sobib paremini nende stabiilsuseks ja aktiivsuseks. Ja see aine suudab selle eesmärgi tõhusalt saavutada; Nukleiinhappe ekstraheerimise protsessis on vaja eraldada nukleiinhapet lisandite ja soolade lahusest ning viia see järgnevate toimingute jaoks uude puhvrisse. See on rakendatav ka selle stsenaariumi jaoks; Rakukultuuri ajal on mõnikord vaja asendada sööde või puhver rakkude kasvu ja aktiivsuse säilitamiseks. Seda saab kasutada kahjulike ainete eemaldamiseks vanast söötmest või puhvritest ning tutvustada uusi kultuurimeediat või puhvreid.
Molekulaarne sõelumine
Valguuuringutes ja ettevalmistamise protsessides on tavaliselt vaja eraldada sihtvalgud keerukatest segudest. See võib eraldada valke nende suuruse põhjal, saavutades seeläbi valkude puhastamise. Elueerimistingimuste, näiteks iooni tugevuse ja pH väärtuse kohandamisega saab valkude eraldamise efektiivsust veelgi optimeerida. Lisaks valkudele ja nukleiinhapetele saab seda kasutada ka muude biomolekulide, näiteks polüsahhariidide, ensüümide, antikehade jms eraldamiseks ja puhastamiseks. Nende geeli biomakromolekulide liikumiskiirus sõltub nende suurusest ja kujust, et saavutada efektiivne eraldamine. Ehkki seda ainet ei kasutata otseselt molekulmassi määramiseks, võib see olla abivahendina molekulmassi määramisel.
Valgu puhastamise protsessis on tavaliselt vaja eemaldada väikeste molekulide lisandid, näiteks soolad, väikeste molekuli metaboliidid, sidumata ligandid jne valgulahusest. See aine võib need väikeste molekulide lisandid valgulahustest tõhusalt eemaldada, parandades seeläbi valkude puhtust. Selle molekulaarse sõela toime võimaldab need väikeste molekulide lisandid tõhusalt eemaldada, mille tulemuseks on puhtamad nukleiinhapped. Ensüümipreparaadid sisaldavad tavaliselt väikeste molekulide lisandeid, näiteks reageerimata substraadid, inhibiitorid, metaboliitid jne. Need lisandid võivad mõjutada ensüümide aktiivsust ja stabiilsust. Materjali geeli filtreerimise kaudu saab neid väikeseid molekulaarseid lisandeid tõhusalt eemaldada ja ensüümide preparaadi puhtust saab parandada. Lisaks valkudele ja nukleiinhapetele
Simuleerige rakkudevaheline signaali ülekanne
Rakkudevaheline signaalide ülekanne on eluaktiivsuse põhiregulatiivne mehhanism, mis hõlmab selliseid keerulisi protsesse nagu rakkude äratundmine, signaali muundamine ja füsioloogiline vastus. Traditsioonilised uuringud tuginevad sageli realiseeritud rakumudelitele, kuid on piiranguid nagu keerulised signaalivõrgud ja mitu segavat tegurit.Sephadex G75on klassikaline Dextrani geeli filtreerimise meedium. Selle poorne struktuur ja molekulaarne sõela efekt annavad ainulaadse füüsilise mudeli rakkudevahelise signaali ülekande simuleerimiseks.
Füüsiline mudel rakudevahelise signaali ülekande simuleerimiseks, kasutades Sephadex G-75
Rakkudevaheliste lõhede ühenduste simuleerimine
Gap ristmik on hüdrofiilne kanal, mis on moodustatud külgnevate rakkude vahel läbi linkeri, võimaldades väikeste molekulide vaba vahetada molekulmassiga<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Signaalimolekulide gradiendi moodustumine: geelkolonni laaditakse signaalimolekulide (näiteks camp, ca ²+) erinevad kontsentratsioonid. Geeli poorides võib täheldada väikeste molekulide difusiooni kiiruse erinevust molekulaarse sõela efekti kaudu ja rakkude vaheliste keemiliste signaalide gradiendi ülekandumist saab simuleerida.
Sünergistlik reageerimise simulatsioon: vastavalt kaks interakteeruvat molekuli (näiteks ligand ja retseptor) on laaditud vastavalt geelkolonni mõlemasse otsa ja nende siduvat kineetikat analüüsitakse elueerimise ajavahe kaudu, et simuleerida molekulaarset äratundmisprotsessi rakkude vahelistes otseses kontaktkommunikatsioonis.
Molekulaarse kontakti simuleerimine membraani pinnal
Membraani pinnamolekulide vaheline side tugineb rakumembraani pinna valkude spetsiifilisele interaktsioonile. Sephadex G-75 saab seda protsessi simuleerida funktsionaalse modifikatsiooni kaudu:
Retseptori ligandi sidumise eksperiment: biotinüleeritud retseptori valgud (näiteks EGFR) fikseeritakse geeliosakeste pinnale, fluorestsents märgistatud ligandid (näiteks EGF) jäädvustatakse streptavidiini biotiinsüsteemi kaudu ja seondumissignaali intensiivsust jälgitakse fluorestsentseandide detektoriga, et Quantify Receptor LIGAND -i aksesse viia.
Konkurentsivõimeline seondumisanalüüs: eelotsikaline retseptori ligandikompleks geelkolonnis, lisage erinevate kontsentratsioonide (näiteks anti -EGFR -i antikehade konkureerivad inhibiitorid), arvutage inhibeerimiskonstant (KI) elueerimise piigi nihke kaudu ja simuleerige ravimite sekkumise mõju rakusignaali radadele.
Keemilise signaali ülekande simuleerimine
Keemilise signaali ülekanne sõltub keemiliste signaalimolekulide (näiteks hormoonide ja tsütokiinide) difusioonist, mida rakud erituvad kehavedelike või rakuvälise maatriksi kaudu sihtrakkudeni. Sephadex G - 75 saab konstrueerida kolmemõõtmelise difusioonimudeli:
Parakriinisüsteemi simulatsioon: sekretoorsed rakud (näiteks makrofaagid) ja sihtrakud (näiteks T -rakud) on kapseldatud geeli mikrosfääridesse ning CO -kultuuri abil täheldatakse sihtrakkude (näiteks CD69 ekspressioon) aktiveerimise olekut, et simuleerida parakriinsete signaalide lokaalset toimet.
Endokriinne signaali ülekandumine: fluorestsentsmärgistatud hormoonid (näiteks insuliin) laaditakse geelkolonni ja nende interaktsiooni geeli pooridega analüüsitakse elueaaja jooksul ning matemaatiliste mudelitega ühendades ennustatakse vereringe ja sihtorgani jaotuse poole - elut.
Sephadex G-75 rakendusjuhtum rakkude signaaliülekande uurimisel
Punaste vereliblede signaali ülekande ja integriini funktsiooni uurimine
Trombotsüütide adhesiooniretseptori integriin IIB 3 on trombotsüütide membraani pinnal kõige rikkalikum glükoproteiin ning see on ülioluline hemostaasi ja trombi moodustumise jaoks. Uurige Sephadex G-75 kasutamist, et simuleerida trombotsüütide ja subendoteliaalse kollageeni vastastikmõju:
Integriini aktiveerimise mudel: puhastatud integriin IIB 3 fikseeriti geeliosakeste pinnale ja ligandina lisati lahustuv fibrinogeen (FG). Sidumise kineetika tuvastati pinnaplasmoni resonantsi (SPR) abil. Leiti, et integriini afiinsus FG -ga pärast aktiveerimist paranes märkimisväärselt (KD vähenes μm -lt NM -ile).
Vastane ravimivastane ravimite sõeluuring: eelkoormatud integriini FG kompleks geelkolonnis, lisage erinevate kontsentratsioonide (näiteks Tirofiban) vastaseid ravimeid, arvutage ravimite inhibeerimissagedus integriini aktiivsuses elueerimise piigi nihke abil ja pakuvad kõrge- läbilaskeplaati uue antitrombootiliste ravimite väljatöötamiseks.
Kasvajaga seotud signaalide radade reguleerimine
Kasvajarakud soodustavad proliferatsiooni ja metastaase signaalimisradade nagu MAPK ja PI3K/Akt ebanormaalse aktiveerimise kaudu. Sephadex G-75 saab kasutada võtmevalkude isoleerimiseks ja puhastamiseks signaalimisradades:
EGFR-i signaali raja uurimine: EGFR valk puhastati Sephadex G-75 geeli filtreerimisega ja selle fosforüülimise seisundit analüüsiti massispektromeetria abil. Leiti, et Y1068 ja Y1086 EGFR -i saitide fosforüülimise tase suurenes pärast EGF -i stimuleerimist märkimisväärselt, mis aktiveeris ERK1/2 allavoolu ja AKT signaale.
Ravimiresistentsuse mehhanismi analüüs: ravimi - resistentsetes maovähirakkudes (SGC7901/VCR) isoleeriti ja puhastati UHRF1 valk Sephadex G-75 abil ning leiti, et selle üleekspressiooni üleekspressioon võib apoptoosiga seotud valkude aktiveerimise (selliste kui kasise-3) abil pärssida.
Immuunrakkude signaalimine ja polüsahhariidide reguleerimine
Punased vetikad polüsahhariidid (BFP) suurendavad immuunvastust, aktiveerides NF - κ B ja MAPK signaaliülekande rajad makrofaagides. BFP ja selle komponentide eraldamise ja puhastamise uuringud (F1, F2, F3), kasutades Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% saadi Sephadex G-75 geeli filtreerimisega koos DEAE tselluloosi 52 ioonvahetuskromatograafiaga ja nende molekulaarsed kaal oli vastavalt 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa ja 45 kDa.
Signaaliraja aktiveerimine: RAW264.7 makrofaagide mudelis võivad BFP ja selle komponendid märkimisväärselt esile kutsuda NO ja TNF - sekretsiooni ning selle mehhanism hõlmab NF {- κ B Nuclear Translokatsiooni ja JnK, ERK ja P38 MAPK fosformatsiooni. Sephadex G - 75 eraldatud puhastatud komponendid näitasid, et F1 -l oli kõige tugevam aktiveerimise mõju NF - κ B ja MAPK radadele (suurendades tootmist 2,5 korda ja TNF -i sekretsiooni 3 korda).
Kuum tags: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, tarnijad, tootjad, tehas, hulgimüük, ost, hind, maht, müügil