Iptg pulbersaab kasutada lokaalanesteetikumi toimekohas, seda kasutatakse leviva ainena -operatiivse haavavalu ja haavandivalu leevendamiseks. Molekulaarbioloogilised reagendid, mida tavaliselt kasutatakse sinise ja valge täpi skriinimisel ja IPTG indutseerisid valgu ekspressiooni bakterites. IPTG, täisnimi isopropüül- - D-tiogalaktosiid, CAS 367-93-1, molekulvalem C9H18O5S, molekulmass 384,37 daltonit, kuulub väikese molekuliga ühendite hulka. Valge või peaaegu valge pulber, mis lahustub vees vähe, kuid lahustub paremini orgaanilistes lahustites. Molekulides on ioonrühmi, seega on neil teatud juhtivus vees. Stabiilne toatemperatuuril, kuid kergesti lagunev kõrgel temperatuuril või tugevate hapete ja leeliste tingimustes. Selge lõhn puudub, kuid kasutamise ajal võib tekkida kerge orgaanilise ühendi lõhn. See on tavaliselt kasutatav indutseerija, mida kasutatakse valgu ekspressiooni esilekutsumiseks bakterites. Meditsiinilises diagnostikas võib IPTG toimida fluorestseeruva sondi või kromogeense ainena konkreetsete molekulide või kudede tuvastamiseks proovides. Kombineerides sihtmolekulidega, võib IPTG genereerida fluorestseeruvaid signaale või värvimuutusi, pakkudes tugevat tuge haiguse diagnoosimisel.
|
Morfoloogiline |
Kristalliline pulber |
|
Värv |
Valge |
|
Sulamistemperatuur |
105 kraadi C |
|
Keemistemperatuur |
350,9 ° C ( ligikaudne hinnang ) |
|
Tihedus |
1,3329 ( ligikaudne hinnang ) |
|
Säilitustingimused |
2-8 kraadi C |
|
lahustuv alkohol |
lahustuv lahustuv 40 osa lahustit |
|
Happesuse koefitsient ( pKa ) |
13.00 ± 0.70 (ennustus) |
|
Vees lahustuv |
50 mg / ml |
|
Leekpunkt |
197,8 kraadi |
|
Lahustuvus |
1.6g/l |
|
Auru tihedus |
5,21 (vs õhk) |
|
Murdumisnäitaja |
1,5060 (prognoos) |
|
|
|
Iptg pulber,Füüsikalised parameetrid, Mp. : 114–121 °C , Kasutuskirjeldus , Levinud molekulaarbioloogia reaktiivid, mida tavaliselt kasutatakse sini{3}}valge sõeluuringu ja IPTG-indutseeritud valgu ekspressioonis bakterites. , Pakendi spetsifikatsioonid , 1G, 5G, 25G, 100G, 1KG , Säilitustingimused
2-8 kraadi jahutatud, valguse eest kaitstud , Ohu kirjeldus , Ohukood : Xi , Riskitase : R36 / 37 / 38 , Ohutusaste : S23-24 / 25-36.
IPTG-d kasutatakse tavaliselt kloonimiskatsetes, mis peavad indutseerima -galaktosidaasi aktiivsust. Seda kasutatakse sageli koos X-Gal või Bluo-Gal-iga rekombinantsete bakterikolooniate sinivalgeks-sõeluuringuks, mida Chemicalbook saab indutseerida lac-operoni ekspresseerimiseks E. coli's. IPTG seondub lacI repressorvalguga ja muudab selle konformatsiooni, et vältida -galaktosidaasi poolt kodeeritud lacZ geeni pärssimist.
IPTG, täisnimi isopropüül- -D-tiogalaktosiid, on tavaliselt kasutatav indutseerija, mida kasutatakse laialdaselt valgu ekspressiooni esilekutsumiseks ja reguleerimiseks. Tänu oma ainulaadsele struktuurile ja funktsioonile valmistatakse IPTG tavaliselt kasutadesIptg pulbersünteesimeetodid laboris.
Sünteetiline marsruut
1. Glükosiidi süntees:
Esmane süntees -D-tiogalaktosiidi sünteesitakse tavaliselt glükosiidide sünteesi meetodil, kondenseerides galaktoosi vastavate alustega (nagu isopropüül). See samm nõuab kaitserühmade kasutamist, et vältida kõrvalsaaduste tekkimist järgmistes reaktsioonides.
2. Fosforüülimisreaktsioon:
Glükosiidide sünteesi põhjal viiakse fosfaatrühmad sisse fosforüülimisreaktsiooni kaudu, et saada isopropüülrühma - -D-tiogalaktosiid-5'-fosfaatester. See etapp nõuab fosfaatide ja vastavate anhüdriidide või hapete kasutamist.
3. Kaitse eemaldamise rühm:
Kaitserühma eemaldamise reaktsiooniga eemaldatakse glükosiidis olev kaitserühm, et saada sihtsaadus isopropüül- - D-tiogalaktosiid. See etapp nõuab reaktsiooni hõlbustamiseks happe või leelise lahuse kasutamist.
Katse etapid:
Valmistage ette reaktiivid ja instrumendid:
Valmistage ette vajalikud suhkrud, alused, kaitserühmad, fosfaadid, anhüdriidid või happed, lahustid ja muud reagendid, samuti vajalikud katseinstrumendid, nagu segajad, termomeetrid, spektrofotomeetrid jne.
Glükosiidide süntees:
Kuumutage ja segage galaktoosi koos vastavate alustega lahustis, lisage katalüsaator ja soodustage kondensatsioonireaktsiooni. See etapp nõuab temperatuuri ja segamisaja ranget kontrolli, et tagada reaktsiooni sujuv kulg.
Fosforüülimise reaktsioon:
Sünteesitud glükosiide kuumutatakse ja segatakse fosfaadi, anhüdriidi või happega lahustis ning fosforüülimisreaktsiooni soodustamiseks lisatakse katalüsaator. See etapp nõuab temperatuuri ja segamisaja kontrollimist, pöörates samal ajal tähelepanu lahusti polaarsusele ja annusele, et tagada reaktsiooni kulgemine ja saaduse teke.
Kaitse eemaldamise rühm:
Sihtprodukti isopropüül- - D-tiogalaktosiidi saamiseks eemaldage happe- või leeliselahuses fosforüülimissaaduse kaitserühm. See etapp nõuab pH väärtuse ja temperatuuri kontrollimist, pöörates samal ajal tähelepanu lahusti polaarsusele ja annusele, et tagada reaktsiooni kulgemine ja toote teke.
Eraldamine ja puhastamine:
Sihtprodukt eraldatakse reaktsioonisegust kolonnkromatograafia, ümberkristallimise ja muude eraldamis- ja puhastamismeetodite abil. See etapp nõuab toote puhtuse ja saagise tagamiseks tähelepanu töötingimustele, nagu temperatuur, lahusti annus, voolukiirus jne.
Analüüs ja tuvastamine:
Sihtprodukti struktuurne identifitseerimine viiakse läbi analüütiliste meetodite abil, nagu tuumamagnetresonants ja massispektromeetria. See samm nõuab vastavate instrumentide, seadmete ja tehniliste vahendite kasutamist, et kinnitada toote struktuuri ja puhtust.
Iptg pulbertäisnimetus isopropüül- - D-tiogalaktosiid on tavaliselt kasutatav indutseerija, mida kasutatakse laialdaselt valgu ekspressiooni esilekutsumiseks ja reguleerimiseks.
1. Valgu ekspressiooni indutseerimine:
IPTG mängib olulist rolli valgu ekspressiooni indutseerimisel. See on laialdaselt kasutatav indutseerija, mis suudab tõhusalt indutseerida spetsiifiliste geenide ekspressiooni bakterites, saades seeläbi soovitud sihtvalgu lühikese aja jooksul. Selle toimemehhanismiks on seonduda bakterite lacI geeniga, inhibeerida selle transkriptsiooni reguleeriva valgu aktiivsust, avades seeläbi bakterite lac-operoni ja käivitades sihtgeenide ekspressiooni. Laktoosioperonite kasutamisel valgu ekspressiooni promootoritena on vaja indutseerijaid ja IPTG võib toimida laktoosianaloogina, et indutseerida galaktosidaasi ekspressiooni Escherichia colis. Rakud ei saa seda kasutada püsiva ekspressiooni saavutamiseks. IPTG seondub lac |-ga produktid, põhjustades konformatsioonilisi muutusi lacO-st eemal, aktiveerides seeläbi transkriptsiooni. Sellest indutseeritavast transkriptsiooniregulatsioonist on saanud E. coli ekspressioonisüsteemi vektorite konstrueerimisel tavaliselt kasutatav element.
2. Geeniekspressiooni reguleerimine:
IPTG mängib olulist rolli geeniekspressiooni reguleerimisel. Olulise eksperimentaalse reagendina mängib see olulist rolli geeniekspressiooni reguleerimises ja valgu üleekspressiooni katsetes. IPTG lisamise aja ja kontsentratsiooni kontrollimisega on võimalik saavutada sihtvalgu ekspressiooni reguleerimine. See reguleeriv toime põhineb IPTG seondumisel lac |-ga produktid laktoosi operonites, muutes nende konformatsiooni, jättes seeläbi lacO ja aktiveerides veelgi transkriptsiooni. See indutseeritav transkriptsiooniregulatsiooni mehhanism muudab IPTG oluliseks sellistes uurimisvaldkondades nagu geenifunktsioon, valkude koostoimed ja ravimite sõelumine.
3. Valkude kristalliseerimine:
Valkude kristallisatsioonikatsetes kasutatakse IPTG-d valkude kristalliseerumise soodustamiseks indutseerijana. Selle toimemehhanismiks on muuta valkude konformatsiooni, seondudes valkude hüdrofoobsete piirkondadega, soodustades seeläbi valgumolekulide vahelist agregatsiooni ja kristalliseerumist. See agregatsiooni- ja kristalliseerumisprotsess on pöörduv, nii et valgu kristalliseerumist saab esile kutsuda IPTG lisamisega või valgu kristalle saab lahustada IPTG eemaldamisega.
Valkude kristallisatsioonikatsetes lisatakse IPTG tavaliselt valgulahusele lõppkontsentratsioonina 1 mM. See IPTG madal kontsentratsioon võib vältida valkude liigset indutseerimist, saavutades seeläbi paremad kristallisatsiooniefektid. Samal ajal võib IPTG toimida ka molekulaarse chaperonina, mis aitab kaasa valkude õigele voltimisele ja agregatsioonile, saades seeläbi ühtlasemad valgukristallid.
Tuleb märkida, et IPTG ei soodusta valgu kristalliseerumist kõigil juhtudel. Mõned valgud ei ole IPTG suhtes tundlikud või nende loomupärase struktuuri ja kristalliseerimiseks mittesobivate omaduste tõttu on erinevate valkude jaoks vajalik eksperimentaalne valideerimine ja optimeerimine, et määrata optimaalsed kristallisatsioonitingimused ja meetodid.
Kõrvaltoimed
Tsütotoksilisus
Toksilisus prokarüootsetele rakkudele
Kuigi IPTG-d kasutatakse tavaliselt geeniekspressiooni esilekutsumiseks prokarüootsetes rakkudes, võivad IPTG kõrged kontsentratsioonid avaldada prokarüootsetele rakkudele toksilist mõju. Uuringud on näidanud, et kui IPTG kontsentratsioon on liiga kõrge, võib see häirida normaalseid metaboolseid protsesse rakkudes. Näiteks võib see mõjutada rakkude energia metabolismi, segada selliseid radu nagu glükolüüs ja trikarboksüülhappe tsükkel, mis viib rakusisese ATP tootmise vähenemiseni ning mõjutab rakkude kasvu ja proliferatsiooni. Lisaks võivad IPTG kõrged kontsentratsioonid kahjustada ka rakumembraani terviklikkust, suurendada selle läbilaskvust, põhjustada rakusiseste ainete lekkimist ja võimaldada rakuvälisest keskkonnast pärinevatel kahjulikel ainetel rakku siseneda, põhjustades seeläbi rakusurma. Katsetes on leitud, et kui Escherichia coli kultiveerida kõrge kontsentratsiooniga IPTG-d sisaldavas söötmes, aeglustub bakterite kasvukiirus oluliselt ja elujõuliste bakterite arv väheneb kultiveerimisaja pikenemisega järk-järgult. See näitab, et IPTG kõrgel kontsentratsioonil on Escherichia coli teatud pärssiv ja tapmine.
Toksilisus eukarüootsetele rakkudele
Lisaks prokarüootsetele rakkudele võib IPTG olla toksiline ka eukarüootsetele rakkudele. Eukarüootsete rakkude ja prokarüootsete rakkude struktuuris ja funktsioonides on teatud erinevusi, kuid IPTG võib siiski erinevate radade kaudu mõjutada eukarüootsete rakkude normaalseid füsioloogilisi funktsioone. Ühest küljest võib IPTG häirida eukarüootsete rakkude signaaliülekande radu. Signaaliülekanne rakkudes mängib olulist reguleerivat rolli sellistes protsessides nagu kasv, diferentseerumine ja apoptoos. IPTG võib muuta signaali ülekande intensiivsust ja suunda, toimides rakkudes teatud signaalimolekulidega, mõjutades seeläbi rakkude normaalset füsioloogilist aktiivsust.
Toksilisus eukarüootsetele rakkudele
Teisest küljest võib IPTG eukarüootsetes rakkudes esile kutsuda oksüdatiivse stressi vastuse. Oksüdatiivne stress viitab rakusisese oksüdatsiooni ja antioksüdantse aktiivsuse vahelisele tasakaalustamatusele, mis viib reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmise suurenemiseni. Liigne ROS võib rünnata rakus olevaid biomolekule, nagu DNA, valgud ja lipiidid, põhjustades rakukahjustusi ja funktsionaalseid häireid. Uuringud on näidanud, et teatud tingimustel suurendab eukarüootsete rakkude IPTG-ravi oluliselt rakusisest ROS-i taset, millega kaasneb rakkude elujõulisuse vähenemine ja apoptoosi kiiruse suurenemine. See viitab sellele, et IPTG võib esile kutsuda oksüdatiivse stressi vastuse ja avaldada eukarüootsetele rakkudele toksilisust.
Kuum tags: iptg pulber cas 367-93-1, tarnijad, tootjad, tehas, hulgimüük, ost, hind, hulgi, müük