Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. on Hiinas üks kogenumaid 3xflag peptiidi cas 402750-12-3 tootjaid ja tarnijaid. Tere tulemast hulgimüügi kvaliteetse 3xflag peptiidi cas 402750-12-3 hulgimüügile siin meie tehasest. Saadaval on hea teenindus ja mõistlik hind.
3XFLAG peptiidon oluline peptiidmarkerjärjestus, mida kasutatakse laialdaselt valgu ekspressiooni- ja puhastusprotsessides biomeditsiinilistes uuringutes. Molekulaarvalem C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. 23 aminohappest koosnev järjestus sisaldab kolme korduvat Asp Tyr Lys Xaa Xaa Asp motiivi, mis annavad sellele spetsiifilised struktuursed tunnused.
Lahustub hästi spetsiifilistes lahustites. Näiteks DMSO-s on selle lahustuvus kõrge, mistõttu on see mugav lahuses operatsioonide ja katsete jaoks. Lisaks võib see kerge kuumutamisega saavutada ka vees hea lahustumisefekti. Sellel on ka mõned erilised omadused. Näiteks on sellel hea antigeensus ja reaktiivsus ning see võib seonduda spetsiifiliste FLAG-vastaste antikehadega. See sidumisvõime muudab selle laialdaselt kasutatavaks sellistes katsetes nagu immunosadestamine. Anti-FLAG-antikehadega konkureerivalt seondudes saab FLAG-i liitekspresseeritud valku, mis seondub FLAG-vastaste antikehadega, immunosadestamise ajal elueerida, saavutades seeläbi sihtvalgu lokaliseerimise, tuvastamise ja puhastamise.
|
Kohandatud pudelikorgid ja -korgid:
|
|
|
Keemiline valem |
C120H169N31O49S |
|
Täpne missa |
2860 |
|
Molekulmass |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Elementaaranalüüs |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3XFLAG peptiidon valguuuringutes kasutatav märgis, mis koosneb 8 aminohappest järjestusega DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Selle põhiülesanne on olla valgu ekspressiooni ja puhastamise marker, pakkudes mugavat ja tõhusat vahendit uurimistöös.
1. Afiinsuspuhastus:
Seda saab kasutada märgisena valkude puhastamisel ja tänu oma kõrgele afiinsusele anti-FLAG-i antikehadega saab sihtvalku kergesti puhastada. Tavaliselt transfekteeritakse sihtvalk rakkudesse ekspressioonivektoriga, mis sisaldab 3X FLAG PEPTIIDI, ja seejärel puhastatakse afiinsusega, kasutades anti-FLAG antikehi, et saada kiiresti ja tõhusalt kõrge puhtusastmega sihtvalk.
2. Immunoloogiline testimine:
Selle kõrge immunogeensuse tõttu saab seda kasutada valgu ekspressiooni ja lokaliseerimise tuvastamiseks. Spetsiifilisi FLAG-vastaseid antikehi kasutades saab sihtvalkude ekspressioonitaseme ja jaotuse kiireks ja täpseks tuvastamiseks läbi viia eksperimentaalseid meetodeid, nagu immunoblotanalüüs ja immunofluorestsentsvärvimine.
3. Klooni filtreerimine:
Seda saab kasutada ka valgukloonide skriinimise hõlbustamiseks. Valgu ekspressioonivektorite ehitusprotsessis võib sihtvalgu geenijärjestuse ühendamine 3XFLAG järjestusega hõlbustada positiivsete kloonide skriinimist sihtvalguga immuuntuvastuse ja muude meetodite abil, kiirendades seeläbi valgu funktsiooni uurimise protsessi.
4. Immunosadestamine:
Seda saab kasutada ka valgu immunosadestamise katseteks. Sidudes 3X FLAG PEPTIDE märgiseid sisaldavad valgud FLAG-vastaste antikehadega ja kasutades seejärel adsorptsioonimaterjale, nagu valgu A/G agaroos või magnethelmed, saab sihtvalgu ja selle interakteeruvad partnerid rakuekstraktidest selektiivselt sadestada, et uurida valkude interaktsioonivõrgustikku.
5. Narkootikumide sõeluuring:
Seda saab kasutada ka ravimite sõeluuringutes. Kombineerides 3X FLAG PEPTIDE märgise huvipakkuva valguga, on võimalik saavutada valgu suure läbilaskevõimega sõelumine. Seda sõelumismeetodit saab kasutada uute ravimite sihtmärkide avastamiseks, ravimite valkude koostoimete hindamiseks ja nii edasi.
6. Valgu funktsioonide uurimine:
Märgiste kasutuselevõtt ei mõjuta oluliselt valkude loomulikku struktuuri ja funktsiooni ning seetõttu saab seda kasutada valkude bioloogiliste funktsioonide, subtsellulaarse lokaliseerimise, interaktsioonide ja signaaliülekande uurimiseks. Märgise 3X FLAG PEPTIDE kasutuselevõtuga saab läbi viia põhjalikke uuringuid-valkude bioloogiliste omaduste kohta, mis aitab paljastada nende toimemehhanisme rakubioloogias ja füsioloogias.
3XFLAG peptiidon peptiid, mis sisaldab 8 aminohapet järjestusega DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Seda kasutatakse tavaliselt valgumärgisena sihtvalkude mugavaks puhastamiseks, tuvastamiseks ja uurimiseks. Biosünteesi käigus saab seda valmistada keemilise sünteesi või geenitehnoloogia meetoditega. Järgmised on geenitehnoloogia meetodite üksikasjalikud sammud:
1. Geenide kujundamine ja sünteesimine:
Esiteks on vaja kujundada tehisgeen, mis sisaldab 3X FLAG PEPTIDE järjestust. See geen peaks sisaldama 3X FLAG PEPTIDE järjestust, samuti sobivaid promootoreid, terminaatoreid ja selektsioonimarkereid (nagu antibiootikumitaluvuse geenid). Geenide kujundamisel tuleks arvesse võtta sihtmärk-peremehe omadusi ja ekspressioonivajadusi.
2. Geeni kloonimine:
Järgmisena kloonitakse kavandatud tehisgeenid sobivatesse ekspressioonivektoritesse. Tavaliselt kasutatavad vektorid hõlmavad plasmiide, viirusvektoreid jne. Kloonimisprotsess sisaldab tavaliselt järgmisi etappe:
-PCR amplifikatsioon: polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) kasutamine sihtgeeni järjestuse amplifitseerimiseks matriitsi DNA-st.
-Seedimine ja ühendamine: PCR-produktid seeditakse restriktsiooniendonukleaase kasutavate ekspressioonivektoritega ja ühendatakse seejärel DNA ligaasidega.
-Transformatsioon: ühendatud ekspressioonivektori teisendamine bakteriaalseteks peremeesorganismideks, nagu Escherichia coli, et moodustada rekombinantne plasmiid.
-Identifitseerimine: rekombinantsed plasmiidid tuvastati PCR-i, ensüümiga lõhustamise, DNA sekveneerimise ja muude meetodite abil, et kinnitada, et sihtgeen on vektorisse edukalt kloonitud.
3. Ekspressiooni sihtvalk:
Transfekteerige konstrueeritud ekspressioonivektor sihtmärk-peremeesrakkudesse, nagu imetajarakud, pärmirakud, putukarakud jne. Rakkudes transkribeeritakse ekspressioonivektor mRNA-ks ja transleeritakse seejärel valkudeks. 3X FLAG PEPTIDE ekspresseeritakse koos sihtvalguga valgumärgisena.
4. Valgu ekstraheerimine:
Koguge transfekteeritud rakud ja teostage rakkude fragmenteerimine, tsentrifuugimine ja muud töötlused, et saada kogu valguekstrakt.
5. Puhastatud valk:
Kasutades afiinsuspuhastusmeetodeid, nagu immunosadestamine ja afiinsuskromatograafia, puhastati koguekstraktist 3X FLAG PEPTIDE märgiseid sisaldavad sihtvalgud. Tavaliselt hõlmab see FLAG-vastaste antikehade sidumist valkudega, mis sisaldavad 3X FLAG PEPTIIDI, ja seejärel nende eraldamist afiinsuskromatograafia kolonnide või magnethelmeste abil.
6. Määrake valgud:
Puhastatud valk tuvastati ja kvantifitseeriti SDS{0}}PAGE geelelektroforeesi, immunoblotimise, massispektromeetria ja muude tehnoloogiate abil, et tagada selle puhtus ja terviklikkus.
Kõrvaltoimed
Biomeditsiinilistes uuringutes ja valkudega seotud katsetes mängivad märgipeptiidid üliolulist rolli. Nad võivad aidata teadlasi sihtvalkude puhastamisel, tuvastamisel ja asukoha määramisel, edendades oluliselt valguteaduse arengut.3XFLAG peptiidon tavaline ja laialdaselt kasutatav märgispeptiid, mis koosneb kolmest korduvast FLAG-märgise järjestusest. FLAG-märgise kujundasid algselt Hopp jt. 1988. aastal ja hiljem arenes need välja sellisteks variantideks nagu 3XFLAG, millel on kõrge afiinsus ja spetsiifilisus ning mis võivad seonduda spetsiifiliste antikehadega, hõlbustades järgnevat eraldamist ja tuvastamist. Kuigi 3XFLAG on katsetes palju mugavust toonud, nagu ka teised bioloogilised ained, võib see põhjustada ka mõningaid kõrvaltoimeid.
Immuunsüsteemiga seotud kõrvaltoimed
Immunogeensus
Immunogeensus viitab aine võimele stimuleerida organismi immuunsüsteemi immuunvastust tekitama. . 3XFLAG-i kui eksogeense peptiidisegmendi võib keha immuunsüsteem ära tunda kui "mitte-ise" komponenti, käivitades seeläbi immuunvastuse. Kuigi 3XFLAG järjestus on suhteliselt lühike, võib see mõnel juhul siiski aktiveerida B-rakke ja T-rakke, mis viib antikehade tootmiseni. Need antikehad mitte ainult ei seondu vaba 3XFLAG-ga, vaid võivad ka ära tunda ja seonduda 3XFLAG-märgist ekspresseerivad liitvalke, mõjutades sulandvalgu normaalset funktsiooni ja jaotumist.
Allergilised reaktsioonid
Allergiline reaktsioon on ebanormaalne immuunvastus, mis on põhjustatud immuunsüsteemi liigsest tundlikkusest teatud allergeenide suhtes. Üksikud isikud võivad kogeda allergilisi reaktsioone, kui kasutavad 3XFLAG-i katsetamiseks või raviks. Allergiliste reaktsioonide sümptomite raskusaste on erinev. Kergetel juhtudel võivad esineda lokaalsed sümptomid, nagu sügelus, lööve ja erüteem, samas kui rasketel juhtudel võivad tekkida süsteemsed allergilised reaktsioonid, nagu anafülaktiline šokk, mida iseloomustab järsk vererõhu langus, hingamisraskused ja teadvusekaotus, mis kujutab tõsist ohtu eluohutusele.
Allergilised reaktsioonid
Allergiliste reaktsioonide mehhanism on peamiselt seotud immuunsüsteemi IgE antikehadega. Kui keha puutub esimest korda kokku 3XFLAG-iga, tunneb immuunsüsteem selle ära allergeenina ja stimuleerib B-rakke tootma spetsiifilisi IgE antikehi. Need IgE antikehad kinnituvad nuumrakkude ja eosinofiilide pinnale. Kui keha puutub uuesti kokku 3XFLAG-iga, seondub see rakupinnal IgE antikehadega, käivitades nuumrakud ja eosinofiilid, mis vabastavad bioaktiivseid vahendajaid, nagu histamiin ja leukotrieenid, mis põhjustab allergiliste sümptomite ilmnemist.
Autoimmuunhaiguste oht
Pikaajaline või korduv kokkupuude 3XFLAG-iga võib suurendada autoimmuunhaiguste tekkeriski. Autoimmuunhaigused viitavad haiguse tüübile, mille puhul keha immuunsüsteem ründab ekslikult oma kudesid ja elundeid, mille tulemuseks on koekahjustused ja funktsionaalsed häired. 3XFLAG võib indutseerida immuunsüsteemi tootma ristreaktiivseid antikehi ja T-rakke molekulaarse simulatsioonimehhanismi kaudu, kus selle aminohappejärjestus on sarnane teatud valkude järjestusega kehas.
Need immuunrakud ja antikehad mitte ainult ei ründa võõrast 3XFLAG-i, vaid kahjustavad ka tahtmatult organismi normaalseid kudesid, põhjustades autoimmuunhaigusi. Näiteks võivad teatud autoimmuunhaigused, nagu süsteemne erütematoosluupus ja reumatoidartriit, olla seotud eksogeensete ainete poolt esile kutsutud autoimmuunreaktsioonidega. Kuigi praegu puuduvad selged tõendid selle kohta, et 3XFLAG põhjustab otseselt autoimmuunhaigusi, ei saa seda potentsiaalset riski ignoreerida.
Mõju raku funktsioonile
Mõnedes eksperimentaalsetes uuringutes on leitud, et 3XFLAG kõrgel kontsentratsioonil võib olla rakkudele toksiline toime. Tsütotoksilisuse ilmingud hõlmavad muutusi raku morfoloogias, rakumembraani terviklikkuse häireid, rakusisese ensüümi aktiivsuse muutusi ja rakkude proliferatsiooni pärssimist. Selle toimemehhanism võib olla seotud 3XFLAG-i ja rakumembraani vahelise interaktsiooniga. 3XFLAGi tugeva negatiivse laengu tõttu
see võib seostuda positiivselt laetud komponentidega rakumembraanil elektrostaatiliste interaktsioonide kaudu, muutes rakumembraani läbilaskvust ja voolavust, põhjustades rakusiseste ainete lekkimist või kahjulike ainete sisenemist väljastpoolt, mõjutades seeläbi raku normaalseid füsioloogilisi funktsioone. Lisaks võib 3XFLAG siseneda ka rakkude sisemusse, häirida signalisatsiooniteid, valgusünteesi ja muid protsesse, mis veelgi süvendab rakukahjustusi.
Mõju raku signaaliradadele
3XFLAG võib häirida rakusisest signaaliülekande radasid ja mõjutada rakkude normaalset füsioloogilist aktiivsust. Rakuline signaalirada on koondnimetus mitmetele molekulaarsetele sündmustele, mille käigus rakud reageerivad välistele stiimulitele, reguleerides olulisi protsesse, nagu rakkude kasv, diferentseerumine ja apoptoos. 3XFLAG võib häirida signaaliradade normaalset ülekannet, toimides signaaliraja võtmemolekulidega, muutes signaaliülekande molekulide aktiivsust või ekspressioonitaset.
Näiteks võib see seostuda rakupinna retseptoritega, inhibeerides konkureerivalt looduslike ligandide seondumist retseptoritega ja blokeerides signaaliülekande; Teise võimalusena võib see siseneda rakku ja seonduda signaaliülekande valkudega, mõjutades valkude fosforüülimist, defosforüülimist ja muid modifitseerimisprotsesse, häirides signaali edastamist ja amplifikatsiooni. See raku signaaliradade häirimine võib põhjustada raku düsfunktsiooni, mõjutades selliseid protsesse nagu rakkude proliferatsioon, diferentseerumine ja apoptoos, mis omakorda võib avaldada kahjulikku mõju kudede ja elundite normaalsele arengule ja funktsioonile.
Mõju raku ainevahetusele
Rakkude ainevahetus on üldnimetus rakkude sees toimuvate keemiliste reaktsioonide jaoks, mis pakuvad energiat ja materiaalset alust raku elutegevuseks{0}}XFLAG võib mõjutada raku ainevahetusprotsesse, häirida raku energia tootmist ja ainete sünteesi. Näiteks võib see mõjutada mitokondrite funktsiooni, mis on peamised aeroobse hingamise ja energia tootmise kohad rakkudes. 3XFLAG võib muuta mitokondriaalse membraani läbilaskvust ja potentsiaali, toimides membraanil olevate valkude või lipiididega, mõjutades mitokondriaalse hingamisahela funktsiooni ja ATP sünteesi,
mis põhjustab raku ebapiisava energiavarustuse. Lisaks3XFLAG peptiidvõib häirida ka rakusiseseid protsesse, nagu glükoosi ja lipiidide metabolism, mõjutades ainete sünteesi ja lagunemise tasakaalu rakkudes ning avaldades negatiivset mõju rakkude normaalsetele füsioloogilistele funktsioonidele.
Korduma kippuvad küsimused
Mis on 3X FLAG?
+
-
3X FLAG-peptiid on 23 aminohappejäägist koosnev sünteetiline peptiid. Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp motiivi korratakse peptiidis kolm korda. Kaheksa aminohapet C--otsas moodustavad klassikalise FLAG-järjestuse (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Mis vahe on lipumärgil- ja 3xflagil?
+
-
Lipu -märgis on üks 8 aminohappest koosnev järjestus, mida tavaliselt kasutatakse immunosadestamise, Western blot ja immunofluorestsentsi rakendustes. Seevastu 3x Flag-märk sisaldab 22 aminohapet, mis annab sellele suurema afiinsuse anti-lipu antikehade suhtes ja muudab selle eriti soodsaks valgu puhastamise töövoogudes.
Kuidas lahustada 3X FLAG?
+
-
Põhilahuse valmistamiseks lahustage TBS-is (50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl-ga) kontsentratsiooniga 5 mg/ml. Jaotage alikvootid ja säilitage –20 kraadi juures. Korduv külmutamine ja sulatamine ei ole soovitatav.
Kuum tags: 3xflag peptiid cas 402750-12-3, tarnijad, tootjad, tehas, hulgimüük, ost, hind, hulgi, müük